A.高純度DNA。 B.載體與目的基因摩爾數之比為1:1。 C.載體與目的基因摩爾數之比為1:3~5。 D.連接反應體系中DNA濃度較高。 E.連接反應體系中DNA濃度較低。
A.不匹配的粘末端可通過部分填補后連接。 B.同聚尾法連接不僅連接效率高,也易回收插入的片段。 C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS終止液抑制限制酶活性,將有利于重組連接。 D.Mg2+-ATP是T4DNA連接酶反應時的必須因素。 E.平末端連接時,在反應體系中加入適量凝聚劑可提高連接效率。
A.其核心是利用末端轉移酶的功能,將載體和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。 B.不易自身環(huán)化。 C.連接效率高 D.適用于CDNA克隆 E.可能會產生某種限制酶切位點。